| Authors ： |
庭屋和夫, 北村惣一郎, 河内寛治, 森田隆一, 谷口繁樹, 関寿夫, 福富正明, 川田哲嗣, 坂口秀仁 |
| Abstract ： |
ヒト同種弁の凍結保存方法を導入し, 凍結保存同種大動脈弁による大動脈弁置換術を開始した. 臨床応用に際して保存同種弁のcell viabilityの確認は重要である. そこで, fluorescein diacetate (FDA)-propidium iodide(PI)染色を応用したflowcytometry(FCM)法を用いて検討した. 病理解剖時, 許可を得て採取した9個の肺動脈弁を検討対象とした. 心停止から弁保存までの温阻血時間は7.3±5.4時間(n＝9)であった. 9個のヒト同種肺動脈弁のうち4弁を冷蔵保存, 5弁を凍結保存とした. 冷蔵保存は, 抗生物質, 仔牛血清を10%及びHEPES bufferを5%を含んだTC-199を保存液として4℃で保存した. 凍結保存は, 冷蔵保存の過程を48時間経過した後に, dimethylsulfoxide 10%, 仔牛血清を10%及びHEPES bufferを5%含んだTC-199を保存液として, プログラムフリーザーを用いて－80℃まで凍結し, その後, 液体窒素槽内(－196℃)で保存した. 凍結保存同種弁の解凍を40℃恒温槽内で約5分間で急速に行った. 保存前と, 保存2週後, 1ヵ月後, 2ヵ月後に弁尖を切離し, cell viabilityを検討した. 同種弁尖を細胞分散して得た細胞浮遊液をFDA 1μ1/ml, PI 1μ1/mlで染色し, flowcytometerを用い計測を行い, FDA陽性, 且つPI陰性の細胞をviabilityを有する細胞とした. 冷蔵保存法では, 生細胞率は保存前90.3±3.6%, 1ヵ月後62.0±3.0%, 2ヵ月後50.3±3.7% と低下していった. 一方, 凍結保存法では保存前91.5±2.3%, 1ヵ月後86.9±2.7%, 2ヵ月後85.0±2.4%であり, 1ヵ月後, 2ヵ月後の時点で冷蔵保存法より有意(p＜0.005)に高値の生細胞率を示した. FCM法による保存同種弁のcell viabilityの測定は優れた評価方法であり, 本法による検討から著者らの方法で凍結保存された同種弁は臨床応用に耐えうるものと判定された. |
